1、無菌操作方式開啟凍干菌種管，加入適量培養液（按菌種選擇培養液，如細菌選擇營養肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養肉湯培養基），吹吸數次，使菌種融化分散。取含 5.0mL～10.0mL相應培養液的試管，滴入少許菌種懸液，使用恒溫培養箱在適宜溫度下培養至規定時間（一般為30℃±1℃ 培養 42h～48h），此為第1代培養物。

2、接種環取第 1 代培養物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應培養基平板（按菌種選擇培養基，如細菌選擇營養瓊脂培養基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝桿菌復合瓊脂培養基、黑曲霉菌選擇MEA培養基），在適宜溫度下培養至規定時間（一般為36℃±1℃ 培養 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養 42h～48h），此為第2代培養物。。

3、取第 2 代培養物中典型菌落，接種于相應培養基斜面或平板（按菌種選擇培養基斜面，如細菌選擇營養瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝桿菌復合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇MEA培養基平板），在適宜溫度下培養至規定時間（一般為36℃±1℃ 培養 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養 42h～48h），此為第3 代培養物。

4、取第 3 代培養物，接種于相應培養基斜面，在適宜溫度下培養至規定時間，此為第4 代培養物。

5、按上述方法培養至所需代數，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數及傳代日期等基本信息。